Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10889/1001
Title: NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου
Authors: Κάνδιας, Νικόλαος
Issue Date: 2008-10-15T09:26:59Z
Keywords: Καλμοδουλίνη
Δίαυλοι SK2
Μεθυπερπόλωση
Keywords (translated): TR2C
NMR
Abstract: Οι ενεργοποιούμενοι από Ασβέστιο, μικρής αγωγιμότητας (SK), δίαυλοι καλίου παρουσιάζουν τασεο-ανεξάρτητη δράση, ενώ ενεργοποιούνται χημειομηχανικά από αυξημένα ενδοκυτταρικά επίπεδα Ασβεστίου (σε εύρος μM), όπως συμβαίνει για παράδειγμα κατά τη διάρκεια ενός δυναμικού ενέργειας. Οι SK δίαυλοι προκαλούν το φαινόμενο της μεθυπερπόλωσης (sAHP) το οποίο περιορίζει την συχνότητα πυροδότησης του νευρώνα κατά τη διάρκεια ενός δυναμικού ενέργειας. Η υψηλή συγγένεια δέσμευσης του Ασβεστίου στους SK διαύλους οφείλεται στην ανεξάρτητη Ασβεστίου αλληλεπίδραση της SK α-υπομονάδας με το C-τελικό τμήμα της Καλμοδουλίνης (TR2C), ιδιότητα που χαρακτηρίζει τους SK διαύλους στην μεγάλη οικογένεια των διαύλων καλίου. Το TR2C τμήμα δεσμεύεται σε μια συγκεκριμένη περιοχή της α-υπομονάδας των SK διαύλων η οποία ονομάζεται CaMBD (CalModulin Binding Domain). Η περιοχή αυτή εντοπίζεται ενδοκυτταρικά στο ελικοειδές C-τελικό τμήμα της συγκεκριμένης υπομονάδας. Σε μια προσπάθεια μελέτης της αλληλεπίδρασης της ελεύθερης Ασβεστίου Καλμοδουλίνης και της CaMBD περιοχής, εφαρμόσαμε φασματοσκοπία NMR σε ένα χαρακτηριστικό της αλληλεπίδρασης σύμπλοκο, που αποτελούνταν από το C-τελικό τμήμα της Καλμοδουλίνης (TR2C) και ένα συνθετικό πεπτίδιο 23 αμινοξέων, αντιπροσωπευτικό της CaMBD περιοχής. Οι πειραματικές συνθήκες ρυθμίστηκαν με χρήση τεχνικών φθορισμομετρίας προκειμένου να καθοριστεί το βέλτιστο περιβάλλον για την αλληλεπίδραση. Η δομή της απο-Καλμοδουλίνης, σε αλληλεπίδραση με τo CaMBD τμήμα, μελετήθηκε με χρήση υψηλής ανάλυσης φασματοσκοπίας NMR (600 & 900 MHz) μέσω 2D και 3D πολυπηρυνικών (1Η, 13C, 15N) φασμάτων. Η χαρτογράφηση της διαταραχής των χημικών μετατοπίσεων στο υπό αλληλεπίδραση TR2C τμήμα αποκαλύπτει την επιφάνεια αλληλεπίδρασης μεταξύ TR2C και CaMBD τμήματος ενώ η αναλυτική δομική μελέτη οδηγεί σε μια NMR δομή για το TR2C τμήμα στο σύμπλοκο με το CaMBD τμήμα.
Abstract (translated): Small conductance Ca2+-activated potassium (SK) channels are voltage independent, chemo-mechanically gated K+ channels, which utilize as their gating cue increases in the levels of intracellular Ca2+ such as occur during an action potential. SK channels underlie the slow afterhyperpolarization (sAHP) that limits the firing frequency during an action potential. SK channels are gated solely by intracellular Ca2+ in the submicromolar range. This high affinity for Ca2+ results from Ca2+-independent association of the SK α-subunit with calmodulin C-terminal domain (TR2C), a property unique among the large family of potassium channels. TR2C binds to a specific region of the α-subunit of SK channels called the CaM binding domain (CaMBD), located intracellular and immediately C-terminal to the inner helix. In an attempt to elucidate the interaction between apo-CaM and CaMBD we apply NMR Spectroscopy to a minimal complex consisting of the C-terminal domain of CaM and a synthetic 23-residue peptide corresponding to the CaMBD core region. Experimental conditions were fine-tuned through Fluorescence spectroscopy in order to identify the optimum conditions for this interaction. The structure of apo-CaM, complexed with the CaMBD, was studied by high analysis NMR spectroscopy (600 & 900 MHz) through 2D and 3D heteronuclear (1Η, 13C, 15N) spectra. Chemical shift variation mapped over the complexed apo-CaM with sk2 peptide reveals the interaction interface while the detailed conformational analysis results to an NMR solution structure.
Appears in Collections:Τμήμα Φαρμακευτικής (ΜΔΕ)

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Nimertis_Kandias(phar).pdf9.57 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.