Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10889/10920
Title: Έκφραση του παράγοντα ETS-2 και γονιδίων των κυτταροκινών σε υποπληθυσμούς βοηθητικών Τ λεμφοκυττάρων ασθενών με παιδική ιδιοπαθή θρομβοπενική πορφύρα
Other Titles: ETS2 and cytokines gene expression in Th cells in patients with children's idiopathic thrombocytopenic purpura
Authors: Φωτοπούλου, Χρυσάνθη
Keywords: Ιδιοπαθής θρομβοπενική πορφύρα (ΙΘΠ)
Αιμοπετάλια
Keywords (translated): Immune Thrombocytopenic Purpura (ITP)
Ets-2
Purpura
Abstract: Η Ιδιοπαθής Θρομβοπενική Πορφύρα (ΙΘΠ), αποτελεί μια αυτοάνοση ασθένεια του ανοσοποιητικού συστήματος, η οποία χαρακτηρίζεται από υπερβολικά χαμηλό αριθμό αιμοπεταλίων. Χαρακτηριστική κλινική εικόνα της νόσου αποτελούν οι μελανιές ή αλλιώς πετέχιες. Η παθογένεια της νόσου προκύπτει από την μη φυσιολογική ανοσολογική αντίδραση, που οδηγεί στην καταστροφή των αιμοπεταλίων του ασθενή. Τα τύπου 1 βοηθητικά Τ λεμφοκύτταρα (Th1), που εκκρίνουν κυρίως τις φλεγμονώδεις κυτταροκίνες, διεγείρουν τον πολλαπλασιασμό και διαφοροποίηση των Β κυττάρων που με την σειρά τους παράγουν τα αυτοαντισώματα που οδηγούν στην καταστροφή των αιμοπεταλίων. Έτσι, ο ρόλος της γονιδιακής έκφρασης των κυτταροκινών φαίνεται να είναι πολύ σημαντικός στην παθογένεια της νόσου. Προηγούμενα αποτελέσματα στο εργαστήριο μας ανέδειξαν, τον σημαντικό ρόλο του μεταγραφικού παράγοντα Ets-2 στην ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης των κυτταροκινών. Παράλληλα ο Ets-2 παρουσίασε μειωμένα επίπεδα έκφρασης σε παρθενικά Th λεμφοκύτταρα που προέρχονταν από ασθενείς με το αυτοάνοσο νόσημα Σκλήρυνση Κατά Πλάκας (MS), σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες.Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία στόχος μας ήταν η μελέτη του κυτταροκινικού γονιδιακού προφίλ υποληθυσμών Th κυττάρων που απομονώθηκαν από παιδιά που πάσχουν από παιδική ΙΘΠ (πΙΘΠ) καθώς και η διερεύνηση του ρόλου του μεταγραφικού παράγοντα Ets-2 στην έκφραση των κυτταροκινών αυτών. Οι Th κυτταρικοί υποπληθυσμοί απομονώθηκαν με την χρήση κυτταροδιαχωριστή ροής (BD FACSAria II) από 5 παιδιατρικούς ασθενείς με ΙΘΠ και 5 υγιείς μάρτυρες αντίστοιχης ηλικίας και φύλου. Η καθαρότητα των υποπληθυσμών των Τh κυττάρων επιβεβαιώθηκε με κυτταρομετρία ροής (FACS ανάλυση). Η κατάσταση ενεργοποίησης των CD4+ κυττάρων προσδιορίστηκε επίσης με FACS ανάλυση με τη χρήση των επιφανειακών δεικτών ενεργοποίησης CD25 και HLADR. Η γονιδιακή έκφραση του παράγοντα Ets-2 και των κυτταροκινών μελετήθηκε με qRT-PCR. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η σύνθεση του Ets2 mRNA ήταν μειωμένη στα παρθενικά Th κύτταρα των παιδιών με πΙΘΠ, σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες. Ωστόσο δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στα επίπεδα Ets2 mRNA στα Th μνημονικά κύτταρα ανάμεσα στους ασθενείς και στους υγιείς μάρτυρες. Η μελέτη της έκφρασης του Ets-2 σε παρθενικά και μνημονικά Th κύτταρα, έγινε και σε πρωτεϊνικό επίπεδο. Ανιχνεύθηκαν χαμηλότερα επίπεδα έκφρασης του Ets-2 σε πρωτεΐνες που απομονώθηκαν από παρθενικά και μνημονικά Th κύτταρα παιδιών με ΙΘΠ σε σχέση με του υγιείς μάρτυρες. Όσον αφορά το προφίλ της γονιδιακής έκφρασης των κυτταροκινών, ανιχνεύθηκαν υψηλά επίπεδα IL17 mRNA σε μνημονικά Th κύτταρα προερχόμενα από ασθενείς, σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες. Επίσης εξίσου αυξημένη ήταν η σύνθεση του IL10 mRNA στα CD4+CD25+ κύτταρα των ασθενών με ΙΘΠ. Τα ίδια κύτταρα παρουσίασαν μειωμένα επίπεδα έκφρασης του FoxP3 mRNA. Όσο αφορά την IL2 και την IFN-γ, παρατηρήθηκε αυξημένη σύνθεση του mRNA στους ασθενείς με πΙΘΠ σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες.Τα αποτελέσματα αυτά επιβεβαίωσαν την Th1 πόλωση που εμφανίζεται στην πΙΘΠ και στο γονιδιακό επίπεδο. Παράλληλα αναδείχτηκε ο σημαντικός ρόλος που παίζει η ανεπάρκεια του παράγοντα Ets-2 στην παθογένεια της νόσου καθώς βιοπληροφορική ανάλυση στους υποκινητές των γονιδίων των κυτταροκινών ανέδειξε πολλές θέσεις πρόσδεσης του παράγοντα Ets-2 σε κάποιους από αυτούς τους υποκινητές. Έτσι ο παράγοντας Ets-2 εμφανίζεται να παίζει σημαντικό ρόλο στην διαφοροποίηση των Th0 κυττάρων και στην γονιδιακή έκφραση των κυτταροκινών. Όταν η δράση ή επάρκεια του Ets-2 μειώνεται επάγεται η εμφάνιση παθολογικών καταστάσεων όπως τα αυτοάνοσα νοσήματα.
Abstract (translated): Immune Thrombocytopenic Purpura (ITP) is an autoimmune bleeding disorder characterized by the abnormally low levels of platelets. Patients with ITP typically present abnormal bleeding into the skin resulting in bruising, or purpura. This occurs from an abnormal immune response that leads to the destruction of the individual’s platelets. T cell immune abnormalities are involved in ITP pathogenesis. Th1 cells primarily secrete the inflammatory cytokines which stimulates B cell proliferation, differentiation and autoantibody production that leads to the destruction of platelets. A higher Th1 response is closely related with the etiology and status of chronic ITP. Thus, the role of cytokine genes expression seems to be very important in the pathogenesis of ITP. Previous results in our lab revealed an important role of the Ets-2 transcriptional factor in the regulation of cytokines gene expression. Ets-2 also showed decreased expression levels in naïve Th lymphocytes derived from patients with another autoimmune disease, Multiple Sclerosis (MS), versus healthy individuals. In the current study we aim to investigate the cytokine gene expression profile in Th subpopulations derived from children that suffer from ITP (pITP) and the role of Ets-2 transcriptional factor in the regulation of cytokines gene expression in the same patients. Th cell subpopulations were isolated with cell sorting (BD FACS Aria II) from 5 pediatric ITP patients and 5 age/sex-matched healthy controls. The cell purity was determined by FACS analysis. The activation status of the CD4+ cells was also determined by FACS analysis with the use of CD25 and HLADR activation markers. Ets-2 and cytokine gene expression was determined by qRT-PCR. Our results showed that Ets2 mRNA synthesis was decreased in naïve Th cells of children with ITP, compared to healthy controls. No differences in Ets2 mRNA synthesis levels were observed in memory Th lymphocytes of both patients and healthy controls. The investigation of Ets-2 proteins levels showed decreased Ets-2 protein levels in naïve and memory Th cells derived from pITP patients compared to healthy individuals. Concerning the cytokine gene expression profile, we observed high levels of IL17 mRNA synthesis in memory Th cells derived from pITP patients vs healthy individuals. IL10 mRNA synthesis was increased and FoxP3 mRNA synthesis was decreased in CD4+CD25+ cells of ITP patients. Increased IL2 and IFN-γ mRNA synthesis levels were observed in the pITP patient’s subpopulations compared to healthy controls. Our results confirmed the Th1 polarization that is documented in pITP at the transcriptional level. In the current work we also revealed the crucial role of Ets-2 transcription factor in the regulation of cytokine genes expression and the pathogenesis of pITP. Bioformatic analysis of cytokines’ promoter sequence revealed several potential Ets-2 binding sites on the cytokines gene promoters. Thus Ets-2 seems to play a leading role in the differentiation of Th0 cells and the regulation of the cytokines gene expression. Downregulation and/or dysfunction of Ets-2 protein induce the development of pathological conditions as autoimmune diseases.
Appears in Collections:Τμήμα Ιατρικής (ΜΔΕ)

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Nemertes_Fotopoulou(med).pdf3.44 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.