Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10889/12848
Title: T regulatory subpopulation characterization in multiple sclerosis patients and analysis of their function
Other Titles: Χαρακτηρισμός των υποπληθυσμών Τ-ρυθμιστικών λεμφοκυττάρων σε ασθενείς με σκλήρυνση κατά πλάκας και των λειτουργιών τους
Authors: Πάππου, Ευθυμία
Keywords: T regulatory lymphocytes
Multiple sclerosis
Keywords (translated): Τ ρυθμιστικά λεμφοκύτταρα
Σκλήρυνση κατά πλάκας
Abstract: Regulatory populations, CD4+CD25+FoxP3+, CD4+CD25+CD127low/-, CD3+CD4+HLA-G+, CD3+CD8+HLA-G+, CD3+CD8+CD28- ,CD3+CD56+ (NKTs) and CD3-CD56bright (NKs) are responsible for antigen recognition and immune system’s regulation. They are critical for autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS). Myelin oligodendrocyte protein (MOG) is a protein of the myelin sheath and MOG peptides act as antigens in patients with MS. The purpose of this study was to evaluate the changes of regulatory subsets and other cell populations in healthy individuals (HC) and patients ± wild type MOG35-55 analogue. Materials and Methods: Heparinized peripheral blood was drawn from nine healthy donors (HC) - (4F/5M, range 23-41 y.o) and eleven patients (8F/3M, range 36-58 y.o) with RR-MS. Peripheral blood mononuclear cells were isolated and 106cells/mL were cultured± MOG35-55 (10pg/ml) for 72h. T cell populations (CD3+, CD4+, CD8+, CD25+, CD28+), Treg subsets (CD4+CD25+/hiCD127low/-, CD4+CD25+/hiFoxP3+, CD3+CD4+HLA-G+, CD3+CD8+HLA-G+ CD3+CD8+CD28-), NKTs (CD3+CD56+), NKs (CD3-CD56hi) and T effector (CD4+CD25-) cells were determined by flow cytometry. Results: The CD4+CD25+/hiFoxP3+ cells were at higher levels in the HC group without MOG35-55, compared to R-MS group, but in AcP patients’ samples +MOG35-55 we observed the highest effect. CD4+CD25+/hiCD127low/- cells were significantly reduced in RR-MS compared to the HC samples, whereas the peptide presence caused a minor increase in HC and AcP groups, but a trend to peptide response characterized the R-MS group. CD3+CD56+ and CD3+CD8+CD28- populations appeared decreased in RR-MS groups compared to HC differing statistically significantly in the latter, but weren’t affected by the presence of peptide in any group. A different expression pattern was observed in CD3-CD56hi cells without the peptide which were reduced in AcP group but increased in the R-MS compared to physiological samples. No difference was observed when the peptide was present. The populations that were increased in RR-MS patients were CD3+CD4+HLA-G+ and CD3+CD8+HLA-G+ withthe former exhibiting statistically significant differences when compared to HC donors. Interestingly, MOG35-55 presence caused a statistically significant decrease in HC group when CD3+CD8+HLA-G+ population was studied, whereas no difference or a minor decrease was observed in AcP and R-MS groups respectively. Finally, in CD3+CD4+HLA-G+ population, the presence of the peptide caused a decrease in HC and AcP groups but the opposite was noticed regarding R-MS group. Conclusions: MOG35-55 presence didn’t affect any of the T populations apart from the CD4+CD25+ effector population of the R-MS group confirming the expected response. On the other hand there was no statistically significant effect of peptide in the populations with regulatory properties possibly due to lack of samples or functionality impairment. Although, the low number of subjects in AcP group does not allow us to address whether MOG35-55 actually affects CD4+CD25+/hiFoxP3+ cells, its impact on their frequency triggers us to further investigate it.
Abstract (translated): Πληθυσμοί με ρυθμιστικές ιδιότητες όπως οι CD4+CD25+FoxP3+, CD4+CD25+CD127low/-, CD3+CD4+HLA-G+, CD3+CD8+HLA-G+, CD3+CD8+CD28- ,CD3+CD56+ (Τ Φυσικά Φονικά,NKTs) και CD3-CD56bright (Φυσικά Φονικά κύτταρα, NKs) είναι υπεύθυνοι για την αναγνώριση αντιγόνων και τη ρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος. Παίζουν σπουδαίο ρόλο σε αυτοάνοσα νοσήματα όπως είναι η Σκλήρυνση κατά Πλάκας (ΣΚΠ). Η MOG είναι μια από τις πρωτεΐνες της μυελίνης και πεπτίδια αυτής δρουν ως αντιγόνα σε ασθενείς με ΣΚΠ. Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να μελετηθούν οι αλλαγές που επιφέρει η παρουσία του πεπτιδίου MOG35-55 σε ρυθμιστικούς υποπληθυσμούς και άλλους πληθυσμούς κυττάρων σε δείγματα υγιών δοτών και ασθενών με ΣΚΠ. Υλικά και Μέθοδοι: Αφαιρέθηκε ηπαρινισμένο περιφερικό αίμα από εννέα υγιείς δότες (4Γ/5Α, εύρους 23-41 ετών) και έντεκα ασθενείς (8Γ/3Α, εύρους 36-58 ετών) με υποτροπιάζουσα/διαλείπουσα ΣΚΠ. Περιφερικά μονοπύρηνα κύτταρα αίματος απομονώθηκαν και 106cells/mL καλλιεργήθηκαν απουσία και παρουσία 10pg/ml MOG35-55 για 72 ώρες. Πληθυσμοί Τ λεμφοκυττάρων (CD3+, CD4+, CD8+, CD25+, CD28+), Τ ρυθμιστικών (CD4+CD25+/hiCD127low/-, CD4+CD25+/hiFoxP3+, CD3+CD4+HLA-G+, CD3+CD8+HLA-G+ CD3+CD8+CD28-), NKTs (CD3+CD56+), NKs (CD3-CD56hi) και Τ δραστικών κυττάρων (CD4+CD25-) μελετήθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Αποτελέσματα: Τα CD4+CD25+/hiFoxP3+ κύτταρα χωρίς MOG35-55 ήταν σε υψηλότερα επίπεδα σε σύγκριση με την ομάδα ασθενών με ΣΚΠ σε ύφεση (R-MS), ωστόσο, παρουσία πεπτιδίου στα δείγματα ασθενών σε οξεία φάση (AcP) παρατηρήθηκε η μεγαλύτερη επίδραση. Τα CD4+CD25+/hiCD127low/- κύτταρα όλων των ομάδων ασθενών ήταν σημαντικά μειωμένα σε σχέση με των υγιών, ενώ η παρουσία πεπτιδίου προκάλεσε μια μικρή αύξηση τους στις ομάδες των υγιών και AcP δειγμάτων, αλλά παράλληλα ανιχνεύθηκε μια τάση προς απόκριση στο πεπτίδιο των R-MS δειγμάτων. Οι CD3+CD56+ και CD3+CD8+CD28- πληθυσμοί εμφανίστηκαν μειωμένοι σε όλους τους ασθενείς συγκρινόμενοι με των υγιών διαφέροντας στατιστικά σημαντικά στους τελευταίους, ωστόσο όλες οι ομάδες παρέμειναν ανεπηρέαστες από την παρουσία πεπτιδίου στις κυτταροκαλλιέργειες.Για τα CD3-CD56hi κύτταρα χωρίς πεπτίδιο παρατηρήθηκε ένα διαφορετικό πρότυπο συχνότητας ˙ μειώθηκαν στην ομάδα AcP αλλά αυξήθηκαν στην R-MS σε σχέση με των φυσιολογικών δειγμάτων. Δεν παρατηρήθηκε διαφορά παρουσία πεπτιδίου. Οι πληθυσμοί που εμφάνισαν αυξημένες συχνότητες στους ασθενείς σε σχέση με τους υγιείς ήταν οι CD3+CD4+HLA-G+ και CD3+CD8+HLA-G+ με τον πρώτο να εμφανίζει στατιστικώς σημαντικές διαφορές συγκρινόμενος με τους υγιείς δότες. Παραδόξως, κατά τη μελέτη του CD3+CD8+HLA-G+ πληθυσμού, η παρουσία του πεπτιδίου MOG35-55 προκάλεσε στατιστικώς σημαντική μείωση στην ομάδα υγιών, εν αντιθέσει με την απουσία ή την ελάχιστη μείωση που παρατηρήθηκε στις ομάδες AcP και R-MS αντίστοιχα. Τέλος, σε ότι αφορά στον CD3+CD4+HLA-G+ πληθυσμό, η παρουσία του πεπτιδίου προκάλεσε μείωση συχνότητας στις ομάδες υγιών και AcP, ενώ το αντίθετο παρατηρήθηκε σχετικά με την ομάδα R-MS. Συμπεράσματα: Η παρουσία του πεπτιδίου MOG35-55 δεν φάνηκε να επηρεάζει κανέναν από τους υποπληθυσμούς Τ κυττάρων πλην της περίπτωσης των CD4+CD25+ δραστικών κυττάρων της ομάδας R-MS επιβεβαιώνοντας μια αναμενόμενη ανοσοαπόκριση στο αυτοαντιγόνο. Από την άλλη μεριά, δεν υπήρχε στατιστικώς σημαντική δράση του πεπτιδίου σε πληθυσμούς με ρυθμιστικές ιδιότητες πιθανότατα λόγω έλλειψης επαρκούς αριθμού δειγμάτων ή της βλάβης στη λειτουργία τους. Παρόλο που ο χαμηλός αριθμός συμμετεχόντων στην ομάδα AcP δεν μας επιτρέπει να ισχυριστούμε ότι το MOG35-55 πραγματικά επηρεάζει τα CD4+CD25+/hiFoxP3+ κύτταρα, η επίδρασή του στη συχνότητα των τελευταίων μας ωθεί σε δρόμους περαιτέρω διερεύνησης.
Appears in Collections:Τμήμα Ιατρικής (ΜΔΕ)

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
master thesis_Efi Pappou.pdfΜεταπτυχιακή Διπλωματική εργασία1.61 MBAdobe PDFView/Open


This item is licensed under a Creative Commons License Creative Commons