Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10889/8925
Title: Ο υποδοχέας RPTP β/ζ επηρεάζει τον κυτταρικό κύκλο και την απόπτωση κυττάρων καρκίνου του προστάτη in vitro
Other Titles: The RPTP β/ζ receptor affects the cell cycle and apoptosis of prostate cancer cells in vitro
Authors: Φωτόπουλος, Μιλτιάδης
Keywords: Καρκίνος προστάτη
Υποδοχείς RPTP
Κυτταρικός κύκλος
Απόπτωση
Keywords (translated): Prostate cancer
RPTP receptors
Cell cycle
Apoptosis
Abstract: Για την εργασία αυτή χρησιμοποιούμε ως δείγματα καρκινικά κύτταρα PC3 και DU145, καθώς και πληθυσμούς των ίδιων κυττάρων, οι οποίοι έχουν διαμολυνθεί με ένα πλασμίδιο που μειορρυθμίζει την έκφραση ενός υποδοχέα, του RPTPβ/ζ. Η διαμόλυνση έγινε από τη Ζωή Διαμαντοπούλου (μια προηγούμενη υποψήφια διδάκτορα), ως μέρος της διπλωματικής της εργασίας, και είναι προφανές ότι, κατά την καλλιέργειά τους, πολλαπλασιάζονται πολύ πιο αργά από τα αντίστοιχα φυσιολογικά κύτταρα. Ο σκοπός αυτής της εργασίας είναι να διερευνήσει εάν αυτό συμβαίνει λόγω μειωμένου ρυθμού εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου ή αυξημένου ρυθμού απόπτωσης, καθώς επίσης και να εξετάσει έμμεσα τις επιπτώσεις της έλλεψης του υποδοχέα, εφόσο αυτό αποτελεί και τη μόνη διαφορά μεταξύ των φυσιολογικών και μετασχηματισμένων κυττάρων. Με σκοπό να διερευνήσουμε το ρυθμό απόπτωσης των τεσσάρων αυτών πληθυσμών, διενεργήσαμε πειράματα κυτταρομετρίας ροής με Αννεξίνη και ΡΙ, ώστε να υπολογίσουμε των αριθμό των βιώσιμων και νεκρωτικών κυττάρων, καθώς και τον αριθμό των κυττάρων που βρίσκονται σε πρώιμη και προχωρημένη απόπτωση. Επιπλέον, κάναμε πειράματα με ανάλυση κατά Western, με σκοπό να εκτιμήσουμε τα επίπεδα των ενεργοποιημένων κασπασών 8 και 3 στα διάφορα κύτταρα. Προκειμένου να μελετήσουμε την ταχύτητα εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου, διενεργήσαμε πειράματα ανοσοφθορισμού με επώαση με BrdU για 4h και 24h, για να υπολογίσουμε το ποσοστό των κυττάρων που είχαν νεοσυντιθέμενο DNA. Τέλος, χρησιμοποιώντας και πάλι την ανάλυση κατά Western, μελετήσαμε τα επίπεδα της πρωτεΐνης Cdt1, η οποία παίζει σημαντικό ρόλο στην αδειοδότηση της αντιγραφής του DNA.
Abstract (translated): For this essay, we are using as samples, PC3 and DU145 prostate cancer cells, as well as populations of the same cells, which had been permanently transfected with a plasmid that, through RNA interference, drastically downregulates the expression of a receptor, RPTPβ/ζ. The transfected cell lines have been made by Zoe Diamantopoulou (a previous PhD student), as part of her thesis, and it is clear to anyone cultivating them, that they proliferate much more slowly than their normal counterparts. The aim this project is to determine whether this is due to increased rate of apoptosis or decreased speed in cell cycle progression, and is also meant to indirectly test the effects of the absence of the RPTPβ/ζ receptor, since this is the only difference between the normal and transfected cells. To examine the rate of apoptosis in the four cell lines, we conducted flow cytometry experiments with Annexin and PI, to determine the percentage of viable and necrotic cells, as well as cells in early or late stages of apoptosis. We also performed Western blots to assess the levels of activated Caspase 8 and Caspase 3 in the various cell lines. With the aim of examining the speed by which cells progress through the cell cycle, we performed immunofluorescence experiments after incubation with BrdU for 4h and 24h, in order to determine the percentage of cells that had newly-synthesized DNA. Finally, we also did Western blots to determine the relative levels of the Cdt1 protein, a key molecule that licences DNA replication.
Appears in Collections:Τμήμα Βιολογίας (ΜΔΕ)

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Μιλτιάδης Φωτόπουλος Διπλωματική Εργασία Μεταπτυχιακού.pdfMain article3.33 MBAdobe PDFView/Open


This item is licensed under a Creative Commons License Creative Commons